NWIPB OpenIR
猪 Btnl5基因的克隆鉴定及抑制NF-κB通路的机制
包琦
2018
摘要        猪类嗜乳脂蛋白 5(Btnl5)属于嗜乳脂蛋 白家族,其同源多为免疫调节白。Btnl5表达序列标签 (ESTs)定位于 小肠,但其 cDNA全长、 蛋白 结构 、蛋白 的组织亚定位 、蛋白 、蛋白 功能 及作用机制 未知。 在该 研究中, 我们使用 cDNA末端 快 速克隆 技术 (RACE, rapid-amplification of cDNA ends)得到 Btnl5基因 cDNA全长 共 3 334 bp,包含 1 680 bp的开放读码框, 编码长度为 559个氨基酸残的多肽 链。 Btnl5蛋白经 预测 具有 多处磷酸化及糖基修饰 ,并且 Btnl5-Myc及 Btnl5-Flag融合 蛋白的大小为 蛋白的大小为 70 kDa左右 ,比 单纯 氨基酸 分子量 (61.87 kDa)大,证明 该蛋白确实 经历 了翻译后修饰。 蛋白结构预测表明 Btnl5蛋白含有信号肽、两段 蛋白含有信号肽、两段 胞外 免疫球蛋白结构域、跨膜和 胞内 的 B30.2结构域。定量 结构域。定量 PCR分析表 明,Btnl5在空肠中具有较高水平的表达 ,而在同为肠道组织的结则表达极低 。 为明确 Btnl5在空肠中的组织亚定位,我们将 Btnl5的胞内区克隆连入原核表达 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 载体,表达纯化后在小鼠中制备了 Btnl5抗血清,采用 血清,采用 血清,采用 血清,采用 血清,采用 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色 检测 Btnl5在空肠 中的定位,实验 发现 Btnl5主要 定位 于空肠上 皮细胞中,且在膜的染色较深。将 Btnl5-Myc质粒转入 293T细胞, 细胞, 使用 anti-Myc抗体 Western检 测 Btnl5-Myc融合 蛋白的定位 蛋白的定位 ,发现 Btnl5-Myc主要定位于细胞膜, 少量 定位于 细胞内, 结合免疫组织化学染色的果说明 Btnl5主要 定位于小肠上皮的细胞膜 上。NF-κB报告基因检测 报告基因检测 显示 Btnl5对 NF-κB信号通路具有抑制作用 。利用 Btnl5的截 短突变体 发现 胞内 B30.2结构域起主要的抑制作用 结构域起主要的抑制作用 。胞外的免 疫球蛋白结构 域和胞内的 B30.2结构域 是蛋白相互作用结构域 是蛋白相互作用,为探索 Btnl5抑制 NF-κB信号 通路的机制,我们过免 疫共沉淀和质谱 分析 ,得到 1270个 Btnl5相互作用蛋 白,其中 有 4个蛋白参 与了 NF-κB信号通路 :TRAF2、p65、TRIM25和 RIP1, 并且 TRAF2和 p65 经过验证确 经过验证确 实与 Btnl5结合 。P65-p50二聚体入 核是 NF-κB 信号通路 活化 的关键步骤。 我们 使用 Western检测了 Btnl5对 p65入核 的影响, 实验 结果 显示 Btnl5的过表达抑制了 的过表达抑制了 MyD88激活的 p65入核,并且 Btnl5的过 表达 抑制 了 p65激活的 NF-κB 信号通路 ,这些结果说明 ,Btnl5可能通过与 p65结合 ,将其绑定于 细胞 膜上,阻止 p65-p50二聚体 的入核 ,抑制了 NF-κB 信号 通路 ,防止 NF-κB 信号通路 过度 活化 。而 NF-κB 信号通路 在肠道免疫调节中起到关键的调控作用 ,Btnl5可能 通过 抑制 NF-κB信号通路的过度活化从而预防肠道炎症的发生。
文献类型学位论文
条目标识符http://210.75.249.4/handle/363003/23852
专题中国科学院西北高原生物研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
包琦. 猪 Btnl5基因的克隆鉴定及抑制NF-κB通路的机制[D],2018.
条目包含的文件
条目无相关文件。
个性服务
推荐该条目
保存到收藏夹
查看访问统计
导出为Endnote文件
谷歌学术
谷歌学术中相似的文章
[包琦]的文章
百度学术
百度学术中相似的文章
[包琦]的文章
必应学术
必应学术中相似的文章
[包琦]的文章
相关权益政策
暂无数据
收藏/分享
所有评论 (0)
暂无评论
 

除非特别说明,本系统中所有内容都受版权保护,并保留所有权利。