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藏药提宗龙胆花中黄酮提取纯化工艺及活性研究
矫晓丽
2012-05
摘要提宗龙胆(Gentiana tizuensis Franch.)为龙胆科(Gentianaceae )龙胆属(Gentiana)植物,青藏各地藏医以其花入药,也称白花龙胆。《藏药志》记载,其藏药名称为“邦见嘎保”,属于“邦见”类藏药,为藏医常用药材[1]。白花龙胆性苦、寒,具有清热解毒、泻肝胆实火之功效,主治目赤咽痛、肺炎咳嗽、胃炎、气管炎等。黄酮类化合物是白花龙胆花中一类含量较高的次生代谢产物,并且具有多种活性。 本文采用超声波提取提宗龙胆花中黄酮类化合物,并对提取工艺进行优化;采用大孔树脂对提宗龙胆花中黄酮类物质进行分离纯化;并测定了经大孔树脂纯化,并用不同浓度乙醇洗脱的3个不同的黄酮组分的抗氧化和抗凝血活性,旨在为提宗龙胆花活性成分开发及丰富其藏医临床应用提供理论依据。 主要研究结果如下: 1. 采用超声波辅助提取提宗龙胆花黄酮类化合物,通过单因素实验选取影响因素与水平,然后在单因素实验的基础上,选用中心复合模型,做三因素三水平共17个实验点(3个中心点)的响应面分析实验。 根据回归分析确定最优提取工艺条件。结果表明最优提取工艺条件为:乙醇浓度70 %,液料比30:1,时间30min,在最优条件下,实际测得的黄酮平均得率为6.34%。 2. 选择8种不同极性的大孔吸附树脂,比较其对提宗龙胆花黄酮的吸附率和解吸率,并绘制静态吸附动力学曲线,筛选出AB-8型大孔吸附树脂作为对提宗龙胆花黄酮进行纯化较为理想的树脂。最佳分离纯化工艺条件为:上样液初始质量浓度为6.50mg/mL,上样体积为100mL,上样pH3.79,以4BV/h的吸附流速上样;洗脱时先用10%乙醇进行洗脱,再用50%的乙醇溶液进行洗脱,解吸剂流速为3BV/h,洗脱体积为4BV。该工艺生产的提宗龙胆花总黄酮含量达到56.29%。 3. 采用UPLC-ESI/MS对提宗龙胆花及大孔树脂洗脱组分的黄酮类成分进行分析,结果表明,提宗龙胆花中黄酮以单糖苷的形式居多,此外还含有二糖苷和少量苷元类物质。在二级质谱中发现有碎片m/z301,317,285的片段,推断可能含有槲皮素、杨梅素、山奈素,对三者的标准品在相同条件下进行解析,其碎片情况一致。因此认为提宗龙胆花中含有以槲皮素、杨梅素、山奈素为苷元的相应的苷类物质。并且,经过大孔树脂洗脱的组分1和组分2,其黄酮类型不一样。4. 提宗龙胆花中总黄酮具有良好的抗氧化活性。并且经过大孔树脂纯化的不同组分,当其黄酮质量分数相同时,抗氧化能力有差异。对DPPH·、羟基自由基和超氧阴离子自由基三大体系的研究表明,提宗龙胆花中总黄酮对DPPH·、 ·OH具有较明显的排除作用,而对超氧阴离子自由基排除作用不是很显著。 5. 经TT、APTT和PT实验测定,提宗龙胆花的黄酮提取液经大孔树脂纯化后所得的3个组分产物具有显著的抗凝血活性,有望开发成新一代抗心血系统疾病药物。
文献类型学位论文
条目标识符http://210.75.249.4/handle/363003/31649
专题中国科学院西北高原生物研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
矫晓丽. 藏药提宗龙胆花中黄酮提取纯化工艺及活性研究[D],2012.
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