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奶山羊乳腺上皮细胞转染高原鼠兔(Ochotona curzoniae)leptin基因及细胞株的建立
庞 礴
2012-05
AbstractLeptin是调节机体能量代谢的关键因子之一。前期研究显示高原鼠兔(Ochot- ona curzoniae)leptin蛋白发生了适应性进化。且最新功能实验研究表明,在温暖或寒冷条件下高原鼠兔leptin都通过减少食物摄取和增加能量消耗调节能量平衡。高原鼠兔leptin显示了更大的适应性产热方面作用的潜力,在改善或治疗代谢紊乱如肥胖、糖尿病和骨质疏松症等方面具有探索意义。 在体细胞核移植和乳腺生物反应器制作成功报道的基础之上,本论文将哺乳动物真核细胞表达载体的构建、奶山羊乳腺上皮细胞系的建立、外源基因转染奶山羊乳腺上皮细胞及转染细胞株的建立等几个方面结合起来,通过前期细胞水平的整合和表达检测,筛选并建立阳性细胞株,为下一步进行转基因克隆羊乳腺生物反应器打下基础,以利于进一步的科学研究和实际应用。实验以高原鼠兔leptin cDNA为模版PCR扩增高原鼠兔ob基因编码区序列,改造并构建了pBC1、pIRES 2-EGFP两个哺乳动物真核细胞表达载体,同时通过组织块法原代培养成功建立了奶山羊乳腺上皮细胞系,并进行了pBC1-lep、pIRES-lep两个真核细胞表达载体的脂质体法转染及转基因细胞的筛选与基因组DNA、mRNA水平的鉴定。 主要研究结论:1)成功克隆了高原鼠兔leptin基因,并插入到pBC1、pIRES2-E GFP两个哺乳动物真核细胞表达载体中;2)成功建立了奶山羊乳腺上皮细胞系;3)筛选并成功建立了转染pBC1-lep、pIRES-lep两个哺乳动物真核细胞表达载体的阳性奶山羊乳腺上皮细胞株,RT-PCR反应及基因组DNA鉴定显示高原鼠兔leptin基因已成功整合到奶山羊乳腺上皮细胞基因组DNA中且能进行RNA水平上的转录表达。
Document Type学位论文
Identifierhttp://210.75.249.4/handle/363003/31659
Collection中国科学院西北高原生物研究所
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GB/T 7714
庞 礴. 奶山羊乳腺上皮细胞转染高原鼠兔(Ochotona curzoniae)leptin基因及细胞株的建立[D],2012.
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