川西獐牙菜毒性及其机制研究

NWIPB OpenIR

	川西獐牙菜毒性及其机制研究
	杨红霞
	2014-05
摘要	藏药清肝热处方中，多以藏茵陈为主药。青藏高原及毗邻地区民间肝炎患者，多以藏茵陈泡水饮用来治疗各种肝炎，疗效确切。我们课题组在对藏茵陈代表植物川西獐牙菜保肝活性及机制研究过程中，发现其提取物给药小鼠时出现短期昏迷、长期昏迷、直至死亡现象。文献中也发现有獐牙菜属植物提取物或单成分副作用或毒性的相关报道。因此，本论文在实验室发现和文献查阅基础上，先进行川西獐牙菜提取物致小鼠机体损伤或死亡等毒副作用观察，再结合小鼠死亡前心律加快现象和“迷走神经心脏效应或心肌细胞收缩—心脏功能”这一反应途径，从细胞、基因和蛋白三个方面对其死亡原因进行探讨。主要研究结果：毒性观察：(1) 不同提取物给药小鼠，正丁醇提取物(SMBE) 28.00 g/Kg·WB致死率为85%，75 %乙醇提取物(SME) 44.00 g/Kg·WB致死率为95 %；(2) SMBE的LD₅₀为21.81 g/Kg·WB，不同剂量给药小鼠预防CCl4致急性肝损伤实验显示，随SMBE给药剂量增加，血清生化指标谷丙转氨酶(ALT)和总胆汁酸(TBA)呈现肝损伤加重趋势，肝切片中肝细胞浸润、细胞核扩大等损伤加剧，肝脏系数逐渐增大；(3) SME的LD₅₀为27.50 g/Kg·WB，不同剂量给药小鼠预防CCl4致急性肝损伤实验显示，随SME给药剂量的增加，肝脏系数呈先降低（恢复）后增加（损伤）趋势，两高剂量组肝切片中肝细胞肿胀和凋亡损伤加重；30 d 低剂量SME(0.02g/Kg·WB)给药小鼠，肝脏、肾脏、胃和脑切片出现不同程度损伤。毒性机制探讨：(1) 小鼠小肠推进率随SME给药剂量(1.25-10.00 g/Kg·BW)增加逐渐降低(30.12-18.79 %)，氯化乙酰胆碱(ACh)能促进由SME抑制的小肠推进率，证实SME和ACh之间的拮抗作用；同时，SME和ACh联合给药小鼠达LD₅₀的时间由SME单独给药时的9 h左右显著缩短到0.4 h之内；(2) 獐牙菜苦苷，龙胆苦苷和芒果苷三种成分对小鼠小肠平滑肌细胞(MUS-M1)的增殖抑制率比三种成分混合对其增殖抑制率明显；三种成分能降低正常细胞中游离钙离子浓度，并能显著性抑制由ACh所引起的细胞中游离钙离子浓度升高，有剂量依赖关系；(3) 三种成分能显著降低细胞中M₂R，M₃R的mRNA表达水平，有引起细胞收缩异常的作用；(4) 獐牙菜苦苷和龙胆苦苷能显著增加心肌细胞中钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的蛋白表达量，增加心率失常发生的可能。由实验结果可知，上述川西獐牙菜不同溶剂提取物能够导致小鼠脏器损伤和急性死亡；其单成分獐牙菜苦苷，龙胆苦苷或芒果苷可以降低心肌细胞中游离钙离子浓度，明显抑制心肌细胞中胆碱受体M₂和M₃的mRNA表达水平，增加CaMKII蛋白表达量（芒果苷除外），提示川西獐牙菜提取物致小鼠死亡原因与“抑制胆碱受体表达→导致心肌细胞收缩异常或减弱迷走神经对心脏跳动的抑制→从而引起心律失常”这一过程有关。
文献类型	学位论文
条目标识符	http://210.75.249.4/handle/363003/32067
专题	中国科学院西北高原生物研究所
推荐引用方式 GB/T 7714	杨红霞. 川西獐牙菜毒性及其机制研究[D],2014.