NWIPB OpenIR
苜蓿(紫花、黄花)再生体系的建立及遗传转化
连 利 叶
学位类型硕士
导师窦全文
2011-05-29
学位授予单位中国科学院研究生院
学位授予地点北京
学位专业植物学
关键词黄花苜蓿 外植体 胚状体 再生 遗传转化
摘要本论文以5个黄花苜蓿,1个紫花苜蓿品种为材料,通过研究不同外植体和不同外源激素组合的培养基对愈伤组织诱导、体胚分化率的影响,以及各外植体对Hyg、Km的敏感性,以期建立高频、快繁、稳定的苜蓿(紫花、黄花)再生体系和高效的农杆菌介导的转化体系,为获得低木质素和高含硫氨基酸的转基因苜蓿提供技术支持和理论依据。主要试验结果如下:
(1)本实验中对4个黄花苜蓿品种kayak、05342、05172、00024子叶、下胚轴愈伤诱导情况研究,发现前3种为高愈伤诱导率品种,在愈伤诱导培养基UM+2mg/L 2,4-D + 0.25mg/L KT的诱导率为80%-100%;kayak下胚轴愈伤组织在0.8% MS分化培养基,05172下胚轴、子叶愈伤在诱导培养基上继代,2个月后均可分化出胚状体,胚状体分化率分别为10%、23%和55%。
(2)紫花苜蓿中苜1号子叶与下胚轴在UM+2mg/L 2,4-D+0.25mg/L KT培养基上,愈伤诱导率可达100%,且继代培养1个月后愈伤组织表面出现原始胚状体,分化率分别为30%和50%。将子叶愈伤组织继续在光照下继代,分化率可达80-90%;待胚状体成熟,移入1/2MS生根培养基上,3-4周可以形成完整植株。
(3)细胞分裂素KT的浓度对愈伤的诱导有一定影响,随着KT浓度升高,愈伤诱导率增加,但过高又影响愈伤的颜色、质地等,不利芽或胚状体的分化。且生长素2,4-D和KT的组合更有利愈伤的形成。
(4)中苜1号和小花子叶、下胚轴最佳Km选择压分别为75mg/L、100mg/L。
(5)将载体pDESAK-APR(含过表达甲硫氨酸合成相关的基因AK、APR)和载体 p449hct-c3h(含干扰木质素合成相关基因HCT、C3H基因)转化到农杆菌LBA4404,以中苜1号为受体材料进行了初步转化。
学科领域生物科学
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://210.75.249.4/handle/363003/3447
专题中国科学院西北高原生物研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
连 利 叶. 苜蓿(紫花、黄花)再生体系的建立及遗传转化[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2011.
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