高原鼠兔(Ochotona curzoniae)leptin的原核表达、纯化及真核表达载体构建

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	高原鼠兔(Ochotona curzoniae)leptin的原核表达、纯化及真核表达载体构建; Prokaryotic Expression, Purification of Plateau Pika(Ochotona curzoniae) Leptin and Establishment of Its Eucaryotic Expression Vector
	Deng ZL(邓治莲)
	2009-06-01
摘要	高原鼠兔（Ochotona curzoniae）是生活在青藏高原3000m以上区域的小型非冬眠植食性哺乳动物，是青藏高原上的关键种和特有种，具有极强的低温低氧耐受能力。Leptin由ob基因编码，是主要由白色脂肪组织分泌的167个氨基酸组成的蛋白，其可与分布于中枢和外周的多个组织器官中的leptin受体结合，发挥多种重要的生物学功能，其中最主要的功能是调节能量代谢。高原鼠兔leptin被看做冷压力敏感蛋白，与高原鼠兔的低温耐受性密切相关。高原鼠兔leptin原核表达以高原鼠兔leptin cDNA为模版PCR扩增高原鼠兔ob基因编码区序列，利用DNA基因重组技术将目的片段克隆到原核表达载体pET30a(+)中，构建高原鼠兔leptin蛋白原核表达载体pET30a(+)/ppleptin，然后将其转化到BL21大肠杆菌中，诱导外源性目的蛋白表达并纯化。高原鼠兔的真核表达以高原鼠兔leptin cDNA为模版PCR扩增高原鼠兔ob基因编码区序列，利用DNA基因重组技术将其克隆到真核表达载体pPICZα中，构建高原鼠兔leptin蛋白真核表达载体pPICZα/ppleptin，并利用电转化法将其整合到毕赤酵母的基因组中，筛选酵母重组子。本研究中，高原鼠兔leptin的原核表达纯化以及真核表达载体的构建，为进一步研究高原鼠兔leptin功能奠定了基础。主要研究结论如下： 1. 高原鼠兔重组质粒pET30a(+)/ppleptin经质粒双酶切、菌液PCR和测序表明原核载体构建正确；SDS-PAGE凝胶电泳图显示，高原鼠兔leptin原核表达成功且纯化获得较高纯度目的蛋白。 2. 琼脂糖凝胶电泳结果、测序和电转化入毕赤酵母后菌液PCR均显示高原鼠兔leptin真核表达载体pPICZα/ppleptin构建成功。
文献类型	学位论文
条目标识符	http://210.75.249.4/handle/363003/46752
专题	中国科学院西北高原生物研究所
推荐引用方式 GB/T 7714	邓治莲. 高原鼠兔(Ochotona curzoniae)leptin的原核表达、纯化及真核表达载体构建, Prokaryotic Expression, Purification of Plateau Pika(Ochotona curzoniae) Leptin and Establishment of Its Eucaryotic Expression Vector[D],2009.