草地早熟禾（Poa pratensis）微卫星分子标记和染色体标记的开发及应用

NWIPB OpenIR

	草地早熟禾（Poa pratensis）微卫星分子标记和染色体标记的开发及应用
	赵闫闫
学位类型	硕士
导师	窦全文
	2016
学位授予单位	中国科学院大学
学位授予地点	北京
关键词	草地早熟禾 Ssr 标记染色体标记
其他摘要	草地早熟禾（Poa pratensis）属禾本科早熟禾属（Poa）多年生草本植物，具有再生能力强、耐寒、耐旱、营养丰富、绿色周期长等特点，草地早熟禾作为优良草坪草和牧草在世界范围内得到广泛应用。本研究主要进行了草地早熟禾 SSR分子标记和染色体标记的开发、应用研究，主要研究结果如下：利用磁珠富集法分离、鉴定获得 15 对多态性 SSR 引物，15 对具有多态性的SSR 引物在 14 个草地早熟禾材料中 SSR 等位基因的数目变化为 3～6，平均个数是 3.8；多态性信息含量（PIC 值）变化范围为 0.39～0.5，其中有 10 对引物的 PIC的最大值接近 0.5。进一步对获得 SSR 引物进行物种转移性测试，结果表明 15对引物中 13 对在扁茎早熟禾（P. pratensis Var. anceps Gaud）中能进行有效扩增，7 对应物在冷地早熟禾（P. crymorphila Keng ex C. Ling）中具有有效扩增。15 对具有多态性的引物中筛选出了多态性较好、条带清晰 3 对（Poap5、Poap9、Poap10）引物，对 18 个早熟禾品种进行指纹图谱的构建，3 对引物在 18 个品种中共检测出 16 个多态性片段，每对引物可以检测到 4～6 个数目不等的片段，平均为 5.33个，片段大小介于 152 bp～227 bp 之间。利用单一引物可将 18 个品种区分为 5～11 种类型，平均为 8.33 个类型。利用这 3 对 SSR 多态性引物指纹图谱可以将 18个品种完全区分开。进一步利用引物 Poap5、Poap9、Poap10 对牧草品种青海草地早熟禾和青海扁茎早熟禾 30 个个体进行纯度鉴定，结果表明青海草地早熟禾的纯度在 70%以上，青海扁茎早熟禾的纯度在 76%以上。通过对建立的草地早熟禾Cot-1文库利用荧光原位杂交（FISH）技术进行筛选，44个克隆中有17克隆在草地早熟禾染色体上具有杂交信号，进一步对筛选出的阳性克隆进行序列分析，最终确定17个克隆中具有4种独特序列。染色体原位杂交表明克隆1、克隆23、克隆94定位在染色体端部，克隆6定位在染色体的近着丝粒区。进一步设计引物利用PCR在基因组对四种序列进行扩增，并对扩增产物进行克隆及序列分析，获得4种重复序列重复单元长度分别为318 bp、27 bp、189bp和189 bp。利用开发出的染色体标记克隆1、克隆6、克隆94以及常用探针5S rDNA和45S rDNA为探针，对6个草地早熟禾品种的中期染色体进行鉴定，结果表明草地早熟禾染色体数目32～112不等，不同品种间以及同一品种不同个体间，染色体数目、不同染色体标记的数目以及组合形式不尽相同。进一步利用开发出的染色体标记对草地早熟禾近缘种青海扁茎早熟禾和青海冷地早熟禾中期染色体进行鉴定，结果表明有4个草地早熟禾染色体标记在扁茎早熟禾中与青海草地早熟禾无明显差异，但克隆6信号在青海冷地早熟禾中有明显差异。本研究开发出的染色体标记可作为揭示草地早熟基因组组成、不同品种及种质染色体特征以及揭示草地早地早熟禾无融合生殖的遗传规律的有力工具。
学科领域	植物学
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://210.75.249.4/handle/363003/5899
专题	中国科学院西北高原生物研究所
作者单位	中国科学院西北高原生物研究所
推荐引用方式 GB/T 7714	赵闫闫. 草地早熟禾（Poa pratensis）微卫星分子标记和染色体标记的开发及应用[D]. 北京. 中国科学院大学,2016.

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