NWIPB OpenIR
黄绿蜜环菌和异叶青兰化学成分及其生物活性研究
史强强
Subtype硕士
Thesis Advisor王启兰
2016
Degree Grantor中国科学院大学
Place of Conferral北京
Keyword黄绿蜜环菌 异叶青兰 化学成分 抗肿瘤 抗氧化 抗肝炎活性
Other Abstract        黄绿蜜环菌(Armillaria luteo-virens),又名黄蘑菇,是一种名贵的野生食药用菌,目前仍处于野生状态,资源量非常有限。黄绿蜜环菌含有丰富的菌多糖、蛋白质、矿物质、氨基酸和多种维生素,具有增强机体免疫力、抑制肿瘤细胞生长等多种药理活性。本文拟通过对黄绿蜜环菌人工培养和深层发酵条件的研究、营养价值和安全性评价的研究、化学成分及药理活性的研究,为黄绿蜜环菌菌丝多糖等活性化合物的开发提供依据。
        异叶青兰(Dracocephalum heterophyllum Benth),系唇形科(Labiatae)青兰属(Dracocephalum)多年生草木,资源量丰富,全草入药,具有明显的平肝、清热、抗病毒和保肝降酶作用。本文拟通过对异叶青兰化学成分的研究、抗氧化活性和抗肝炎活性的筛选、活性组分对肝炎的治疗作用的研究,为异叶青兰抗肝炎新药的开发提供数据支持。
        开展的主要工作分以下几方面:
        (1)黄绿蜜环菌菌丝体人工培养条件研究。黄绿蜜环菌菌丝体人工培养优化条件为:马铃薯浸出液 20%、黄豆芽浸提液 10%、KH 2 PO 4  0.3‰、MgSO 4  0.3‰、V B1 +V B2 (等比例)1 mg/L、蒸馏水 1 000 mL、pH 6.5、培养温度 25℃。
        (2)黄绿蜜环菌菌丝体深层发酵条件研究。黄绿蜜环菌菌丝体深层发酵优化条件为:摇瓶装液量 150 mL/500 mL、搅拌速度 125 r/min、发酵时间 10 d、接种量 15%。
        (3)黄绿蜜环菌菌丝体营养价值及安全性评价。在黄绿蜜环菌菌丝体与子实体营养成分对比中发现,菌丝体中蛋白质及氨基酸含量比子实体中的含量高,而脂肪和无机元素的含量则比子实体中的低。黄绿蜜环菌菌丝体重金属含量和致病数量基本符合食用菌及其制品国家标准(GB 7096-2014)中的规定。
        (4)黄绿蜜环菌菌丝体化学成分的研究。经 DEAE-52 纤维素柱色谱分离纯化,黄绿蜜环菌菌丝体多糖含量可达到 99%以上,主要由阿拉伯糖和木糖组成。通过多种柱层析色谱技术,从黄绿蜜环菌菌丝体中分离得到 6 个小分子化合物,分别鉴定为麦角甾醇(Ⅰ Ⅰ)、(24S)-3β-Hydroxy-24-methylcholesta-5,8,22-triene-7-one( Ⅱ)、(22E)-3α,5α,8β,11β-Diepidioxy-ergost-22-en-12-one( Ⅲ)、N6-(2-羟乙基)腺苷(Ⅳ Ⅳ)、尿嘧啶核苷(Ⅴ Ⅴ)、5′-dexy-5′ureidoadenosine( Ⅵ)。
        (5)黄绿蜜环菌菌丝体多糖对荷瘤小鼠抗肿瘤活性研究。黄绿蜜环菌菌丝体多糖能够抑制肿瘤生长,提高免疫力,且无任何毒副作用。
        (6)异叶青兰化学成分研究。利用柱层析色谱技术对异叶青兰乙醇提取物主要化学成分进行分离纯化,最终分离鉴定出 14 个,分别为:β-谷甾醇(1)、齐墩果酸(2)、乌苏酸(3)、坡模酸(4)、2α-羟基乌苏酸(5)、芹黄素-7-O-芸香糖苷(6)、苯乙醇-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、毛蕊花糖苷(8)、去氢二松柏醇-9-O-β-D-葡糖糖苷(9)、迷迭香酸(10)、迷迭香酸甲酯(11)、木犀草素(12)、香叶木素(13)、邻苯二甲酸二异丁酯(14)。
        (7)异叶青兰提取物药理活性。通过自由基清除实验、脂质过氧化实验、金属离子还原实验、金属离子螯合实验、总多酚含量测定等方法对异叶青兰提取物抗氧化活性进行研究。结果表明:异叶青兰乙酸乙酯提取物抗氧化活性最强,其它依次为正丁醇提取物、石油醚提取物、水提取物,并且抗氧化活性与总多酚含量呈正相关性(R 2 >0.9)。以刀豆蛋白酶 A(ConA)诱导的肝炎小鼠为实验动物对异叶青兰提取物抗肝炎活性进行研究。结果表明:异叶青兰石油醚提取物和乙酸乙酯提取物可显著延长小鼠生存时间,降低死亡率;乙酸乙酯提取物可明显降低血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量(P<0.01);病理学分析结果表明:乙酸乙酯提取物能够改善肝组织病变情况,抑制肝细胞坏死、凋亡;乙酸乙酯提取物能够通过抑制 TNF-α mRNA 的表达量(P<0.01)来降低血清中 TNF-α 的含量(P<0.001),从而减轻炎症反应及由此引发的肝损伤;并且能够抑制肝脏中的 Kupffer 细胞增殖,降低炎症反应;招募 MDSCs 细胞,发挥免疫抑制作用,降低免疫性肝损伤。
        通过人工培养可获得了大量黄绿蜜环菌菌丝体,完成了菌丝体营养价值及安全性、化学成分及药理活性等方面的研究,为黄绿蜜环菌菌丝多糖等活性化合物的开发提供了依据;完成了对异叶青兰化学成分、抗氧化活性和抗肝炎活性的筛选,活性组分对肝炎的治疗作用的研究,为异叶青兰治疗肝炎提供了数据支持。
Document Type学位论文
Identifierhttp://210.75.249.4/handle/363003/5908
Collection中国科学院西北高原生物研究所
Affiliation中国科学院西北高原生物研究所
Recommended Citation
GB/T 7714
史强强. 黄绿蜜环菌和异叶青兰化学成分及其生物活性研究[D]. 北京. 中国科学院大学,2016.
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