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高原鼠兔(Ochotona curzoniae)血浆NO含量测定及eNOS cDNA部分序列的克隆 | |
杨晓林 | |
学位类型 | 硕士 |
导师 | 赵新全 |
2010-05 | |
学位授予单位 | 中国科学院研究生院 |
学位授予地点 | 北京 |
学位专业 | 动物学 |
关键词 | 高原鼠兔 No Enos Hplc Race Rt-pcr |
摘要 | NO是内皮依赖性血管舒张因子(endothelium-derived relaxing factor,EDRF)的代表,由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)作用于L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)、还原性辅酶II(NADPH)和分子氧所产生。NOS有三种同功酶,分别是内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS);其中eNOS主要存在于动静脉的血管内皮细胞,与血管收缩和舒张有着直接的关系。高原鼠兔(Ochotona curzoniae),世居在青藏高原3200m以上的高寒草甸、高寒草原上,是青藏高原地区的关键种和特有种,历经长期的自然选择,其生理生化、解剖学和组织学等研究表明其是一种典型的低氧适应动物。为研究高原鼠兔eNOS在其低氧适应中的作用,本研究进行了如下实验:(1)运用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定不同海拔条件下高原鼠兔血浆中硝酸根(NO3-)的含量来间接反映其NO含量;(2)以高原鼠兔肺组织RNA为模板,RT-PCR和RACE技术扩增eNOS cDNA的部分片段并进行序列分析。主要研究结论如下: (1) 建立了HPLC测定高原鼠兔血浆内NO的方法;并测得青海青藏高原地区的高原鼠兔血浆NO含量范围在在73.0mg/L ~168.2mg/L。 (2) HPLC法测定结果发现,高海拔即低氧分压条件下,高原鼠兔血内NO含量较高;不同海拔地区的高原鼠兔NO含量有差别。结果暗示高山动物在低氧诱导下,NOS活性增加。 (3) 运用RT-PCR技术,扩增得到两段高原鼠兔eNOS cDNA 序列片段,分别是873bp和364bp,经序列分析,跟挪威鼠和家鼠的同源性达88%,跟人的同源性达91%。 (4) 把两段序列拼接,目前已得到1206bp的高原鼠兔eNOS cDNA序列; RNA和蛋白二级结构预测结果显示其二级结构稳定;此部分蛋白组成为а/β结构类,а螺旋47个,β-折叠99个,β-转角155个,无规则卷曲97处。 (5) 经同源比对发现,拼接序列在氨基酸水平含两个特异位点,是参与比较的平原动物所没有的,可能跟低氧适应有关。 |
学科领域 | 生物科学 |
语种 | 中文 |
文献类型 | 学位论文 |
条目标识符 | http://210.75.249.4/handle/363003/3428 |
专题 | 中国科学院西北高原生物研究所 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 杨晓林. 高原鼠兔(Ochotona curzoniae)血浆NO含量测定及eNOS cDNA部分序列的克隆[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2010. |
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杨晓林硕士论文高原鼠兔(Ochotona(1954KB) | 开放获取 | 使用许可 | 请求全文 |
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